| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 391-1 | ||||
Resumo:As leveduras do gênero Candida são patógenos emergentes que causam a maioria das infecções fúngicas invasivas em pacientes imunocomprometidos. Para enfrentar a resistência antifúngica, é necessário adotar estratégias com o uso de antifúngicos existentes e investimentos em pesquisas científicas para novas terapias. Os peptídeos antimicrobianos (AMPs) são moléculas promissoras que podem ser usadas para combater patógenos resistentes à medicamentos. Neste estudo foram purificadas AMPs pertencentes à família das proteínas transferidoras de lipídios (LTPs) em sementes de pimenta Capsicum chinense Jacq. A eficácia inibitória desses peptídeos no crescimento da levedura Candida albicans também foi também investigada. Os peptídeos foram extraídos e posteriormente purificados por cromatografia de troca iônica em resina DEAE-Sepharose e cromatografia líquida de fase reversa em sistema de HPLC. A cromatografia de troca iônica resultou em duas frações denominadas de C1 (fração não retida) e C2 (fração retida). A fração C1 foi submetida à purificação em HPLC devido a imunodetecção de uma LTP por técnica de western blotting utilizando um anticorpo anti-LTP de C. annuum. A partir da fração C1, após cromatografia de fase reversa, foram obtidas dez frações denominadas de P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7 P8, P9 e P10. Após ensaio de inibição do crescimento, com exceção da fração P4 e P9, todas as demais apresentaram valores inibitórios significativos no crescimento de C. albicans. A análise de viabilidade dessas frações, na concentração de 100 µg/mL, sobre C. albicans não apresentou atividade fungicida e sim fungistática. A fração do P10, a qual apresentou em seu perfil eletroforético três bandas proteicas entre 6,5 kDa e 14,2 kDa, reagiu positivamente contra o anticorpo anti-LTP. A banda reativa apresentou massa molecular próxima de 9 kDa e foi também caracterizada por espectrometria de massas. Os resultados da análise dos resíduos de aminoácidos obtidos apresentaram similaridade com LTPs do tipo I e LTPs do tipo II. Para continuação da purificação, a fração P10, foi submetida a uma recromatografia em sistema de HPLC. Após a recromatografia obteve-se três novas frações, denominadas de R1, R2 e R3, as quais reagiram positivamente ao anticorpo anti-LTP. Em resumo, nossos resultados demonstram a presença de LTPs em sementes de C. chinense com atividade inibitória contra o crescimento de leveduras do gênero Candida.
Palavras-chave: Candida, Capsicum, Peptídeos antimicrobianos, Proteína transferidora de lipídios Agência de fomento:FAPERJ | |||||